试管看胚胎是怎么看生殖支原体？

来源：试管机构网作者：试管机构网更新时间：2024-09-30 点击数：

声明：细节生殖支原体是所有支原体中最小的基因组。法国m .詹妮尔指出，在性传播疾病方面有两个重要发现，其中之一就是生殖支原体。对生殖支原体的生物学特性、致病性和抗生素治疗进行了深入的体外研究。对生殖支原体的认识很早就开始了。生殖支原体外观呈瓶状，末端呈杆状结构。生殖支原体是所有支原体中最小的基因组。最适宜的生长温度为37。生长非常缓慢，在一般培养基、液体培养基和好氧条件下不生长，在不含醋酸铊的SP-4培养基中生长。生殖支原体可通过自身的粘附结构粘附在上皮细胞和红细胞表面，并可在细胞表面滑动，逐渐进入上皮细胞和红细胞而致病。生殖支原体感染与非淋菌性尿道炎有关。如何看待试管内胚胎有人用PCR技术检测非淋菌性尿道炎？衣原体阳性患者尿液中生殖支原体阳性率为28%，而衣原体阴性患者尿液中生殖支原体阳性率仅为7%。

自1981年首次从非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分离出生殖支原体(Mg)以来，对Mg的研究日益增多。从基因蛋白质组、生物学特性、培养特性等基础研究到致病性、耐药性、治疗等临床研究都取得了巨大的成就。Mg是基因组最小的能自我复制的生物体，广泛存在于人类和动物宿主中。随着检测技术的不断发展，由镁引起的临床相关疾病问题已引起医学界的广泛关注，其在泌尿生殖道等相关疾病中的作用也越来越受到重视。如何看待试管内胚胎由于缺乏有效的治疗方法和疫苗，Mg感染一直影响着人类健康，进而引发一系列社会经济问题。最近大量的流行病学研究表明，Mg的感染率正在逐渐上升，有必要对Mg感染有一个全面深入的了解，以便制定新的防控策略。Mg的基因组序列已经完成，这使得在分子水平上研究Mg的致病性成为可能。研究镁的致病性及其与其他疾病的关系具有重要的临床意义。 Mg对培养基要求极高，生长缓慢，很难培养。尤其是临床标本中Mg的培养不易成功。 Mg对培养基要求高，生长缓慢，培养困难，尤其在临床标本中。1981年，Tully1981建立了对医学支原体具有重要意义的SP-4培养基。适合Mg生长的SP-4培养基不含乙酸铊、葡萄糖等Mg代谢所需的营养物质，最适pH为7.4-7.5。加入0.8%的诺氏琼脂或0.5-0.6%的琼脂即可固化，可用于克隆菌株和观察菌落。Tully等人使用该培养基从13个尿道分泌物样品中分离培养出2个Mg菌株，培养周期约为50天。1996年，詹森等人还报道了另一种适合镁生长的培养基，即改良的弗里斯肉汤培养基。聚合酶链反应检测的11份尿道分泌物标本中，6份为阳性。国内学者对SP-4培养基进行了改良。赵继文等用改良的SP-4培养基成功地从性病和性功能障碍人群中分离出镁。初始生长时间超过30天，平均37.83天，最长55天。支原体的组织培养可以提供一个与体内相似的良好生长环境。早在20世纪60年代，Chanock等人就报道了肺炎支原体(Mp)在组织细胞中的生长。20世纪90年代，Jensen等人开始尝试用细胞培养的方法复制Mg，并在电镜下观察Mg侵入细胞的过程及其在细胞内的定位。在PCR的监控下，Jensec发现9个经11分钟PCR检测出MgDNA阳性的尿道标本适合在Vero细胞头中增殖，经多次传代培养后转移到改良的Friis fF肉汤培养基中，6个尿道标本能够继续传代培养，最终在琼脂培养基中克隆出4个菌株。詹森认为，细胞培养和繁殖过程在分离和获得新的镁菌株中起着三个作用。一是逐渐适应临床标本中的Mg在人工培养基中生长，二是增加支原体肉汤培养基中接种的支原体数量，三是提供持续的接种来源。根据镁的免疫学特性，建立了检测镁抗体和检测鉴定镁抗原的血清学方法。 Furr等在1984年详细报道了检测Mg抗体的MIF技术。Moller等人用MIF检测了31例未检测到ct和Mh血清抗体的急性盆腔炎患者的Mg抗体，发现其中约40%的患者在发病后1个月内抗体滴度有4倍以上的变化。Taylor-Robinson报道用间接MIF检测非淋菌性尿道炎患者的Mg抗体，认为间接MIF试验是一种敏感、特异、简便的检测方法。Jensen等人用EIA检测有尿道炎症状和无尿道炎症状的男性性病患者急性血样中的Mg抗体，发现反应性较弱，与Mp有广泛的交叉反应。 src=/d/file/picc/shiguanyinger2562.jpg border=0 /> 根据特异性抗体能阻止支原体的生长及代谢这一特性，试管看胚胎是怎么看可采用已知高价血涉及进行祖先生长及代谢抑制试验以鉴别支原体。赵季文等曾采用MIT鉴定所分离获得的Mg菌株。暴露于支原体表面的脂结合膜蛋白（lipid-associated membrane proteins,LAMPs是一种支原体种属特异性抗原，具有高抗原性，且不同菌株的支原体，其LAMP抗体具有高度种属特异性，与其它种属无交叉反应。）因此提取Mg的LAMP建立ELISA方法检测Mg抗体，可消除Mg与Mp之间的交叉反应。 DNA探针聚合酶链反应（PCR）检测Mg的方法，克服了前两类检测方法的弊端，为研究Mg与疾病的病因学关系提供了有力的手段。 1987年Hyman用PUCB载体构建成Mg基因文库，并从中筛选制备出特异性DNA探针，通过斑点杂交，可检测仅含0.1ng的特异性支原体DNA，即105CFU。 PCR是一种新的基因诊断技术，灵敏度高，特异性强，且快速、简便。1990年，PCR技术开始在医学支原领域应用。早期的引物多参照菌体末端特异性粘附蛋白的DNA序列而设计。Palmer等体外扩增Mg粘附蛋白的部分核苷酸序列，3株Mg均出现37bp的DNA片断，并证明PCR技术可检测到10-15g的mg-DNA，其引物序列的：

mg1:5TGT CTA TGACCA GTA TGT AC3 mg2:5CTG CTT TGG TCA AGA CAT CA3 mgPa-1 5AGA TGA TGA AAC CCT AAC CCC TTG G3 mgPa-1 5GAC CAT CAA GGT ATT TCT CAA CAG C3 mgPa-1 5CCG AGG GGT TTT CCA TTT TTG C3 用MgPa-1 和MgPa-3成功地扩增出Mg的281bpDNA片段，5个临床分离株扩增出同样的产生，而其他支原体和细菌均为阴性，用MgPa-2作探针，对扩增产物经Southern eP印迹杂交，均为阳性，证明引物具有特异性，共检出下降大约有50个Mg细胞。1993年Jensen等又根据Mg粘膜蛋白基因设计了另一对引物，即： mgPa-476：5‘ATG GCG AGC CTA TCT TTG ATC CTT TAA 3’ mgPa-903：5‘TTC ACC TCC CCA CTA CTG TCC TAA TGC3’ 用来证实和补充引物MgPa-1和MgPa-3所扩增的结果，其扩增片段为453bp。研究发现，这两对Mg粘附蛋白引物的敏感性完全一致。用这种方法检测99例尿道炎病人的尿道拭子，结果17例Mg阳性，而用培养法无一例阳性。 1994年Jensen扩增Mg粘附蛋白基因序列并测序表明：该序列在Mg条件之间有明显异质性，为此，Jensen等学者根据原体属性高度保守区域16SrRNA的基因序列，设计了种特异性PCR引物，以期检测临床标本中所有Mg的感染：其引物序列为： Mg-1，试管看胚胎是怎么看5‘GAA TGA CTC TAG CAG GCA ATG GCTG3’ Mg-2，5’ATT TGC TGC TCA CTT TTA CAA GTT GGCT3‘ 4种临床标本的实验结果表明，Mg粘附蛋白的基因序列不相同，但其165rRN基因序列则是100%同源，将两种引物PCR结合，还可在可疑阳性标本中检测出10-50个Mg基因拷贝以下的Mg基因，即以16SrRNA基因为靶基因的PCR系统在保证长期特异性基础上更为灵敏。赵季文等采用Palmer设计的引物，扩增mg37bpDNA片段，检测三种人群的Mg，结果是性乱人群阳性率为25.26%，性病人群为12.33%，而健康人群为3.85%。孔繁荣等[20]采用Jensen设计的MgPa-1和MgPa-3，扩增Mg281bpDNA片段，检测结果是性乱妇女Mg检出率为10.2%，STD患者为4.0%。 1998年，糜祖煌等[2]研究报道了分别以Mg粘附蛋白和16rRNA基因为靶基因建立的二种套式PCR检测技术，试管看胚胎是怎么看前者扩增生Mg的374bpDNA片段，后者扩增产生241bpDNA片段。套式PCR不仅提高了灵敏度，而且因采用两对不同的引物，特性也进一步的得到提高。用这些法检测40例女性STD患者，发现Mg阳性12例，阳性率30%，检出阳性率均高于普通PCR法。微生物感染诊断的“金标准”是培养法，然而Mg培养成功率极低，有待于对培养基进行进一步的研究和改良，以促进Mg在其中的生长；此外，将细胞株引入Mg的培养可能是一个较好的方法，有必要加强这方面的探索和研究。免疫学检测方法因支原体种属间易出现交叉反应以及对抗原、抗体纯度要求较高而在实际应用上受到一定限制，若能研究建立快速、灵敏、特异的检测临床标本中Mg抗原的方法，则具有较大的实用价值。PCR技术是一个简单而又直接的检测Mg方法，正被日益广泛地采用，主要用于Mg感染的早期诊断或急性感染的诊断及各种人群中Mg的流行病学研究。但在应用时应注意：①临床标本中Mg含量低，DNA纯度不够，抑制物过多，TaqDNA聚合酶活性低均会引起假阴性，应进一步完善模板DNA的提取技术；②因PCR灵敏度极高，试管看胚胎是怎么看在整个操作过程中均应严格避免PCR产物的污染，以减少假阳性。在性活跃的年轻人群中泌尿生殖道异常与Mg卫之间有强相关性，有症状患者中Mg阳性率高达12%。一项对335例有尿道炎症状的男性患者进行相关致病原的检测研究结果强烈支持Mg在男性尿道炎中的致病作用。许多病例对照研究显示急性NGU患者的Mg感染率明显高于对照组，提示Mg是急性NGU的高危因素，并且发现感染Mg的患者比感染沙眼农原体(Ct)的患者更容易出现尿道炎症状，提示Mg可能是尿道中独立于ct的致病因子，去除ct因素后，Mg与NGU的相关性有所提高，进一步说明了Mg在NGU中有独立的致病性。临床上许多有症状的复发性NGU患者经抗生素治疗后Mg仍阳性，提示Mg持续存在于尿道可能是导致NGU复发的原因。半数男性在一生中至少出现过1次前列腺炎症状，但90%的患者找不到明确病因，推测前列腺可能藏匿了不易被传统技术检测到的微生物。PCR检测慢性顽固性前列腺炎患者中的病原体，结果显示Mg感染与慢性前列腺炎可能有一定联系。另外Mg在慢性前列腺患者精液中检测率亦高于正常健康人群。但Mg在前列腺炎中的致病作用目前还不确定。有研究者对细菌性阴道病患者进行Mg检测，但未发现Mg与细菌性阴道病之问有明显联系。 2、Mg与黏液脓性宫颈炎(mucopurulent cervicitis，MPC) 对非洲西部826位女性性工作者进行大样本临床研究发现其中26．3%感染有Mg，并发现Mg与宫颈炎相关。Mg感染作为引起宫颈炎症的独立致病因子，是MPC的高危因素，故有必要将Mg考虑为MPC(尤其是未发现NG和Ct感染的MPC)潜在的重要病原体。 58例组织学已经证实为子宫内膜炎的患者中有9例检测Mg阳性，显示Mg感染与子宫内膜炎存在一定关联。试管看胚胎是怎么看

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